[Член (365WT)]Відповіді [Китайський ] | Час :2018-02-22 | З розвитком методів поділу рідини високої ефективності (ВЕРХ) і Orbitrap (The Orbitrap) мас-спектрометрії, рідинної хроматографії тандемной мас-спектрометрії (ЖХ-МС / МС) в даний час домінуючою технологією при аналізі протеоміки. Основний етап ідентифікації білків (від низу до верху), як правило, показане на малюнку справа: зразок зібраного після перетравлення загального білкового екстракту → різання → білка є фрагмент поліпептиду поділу ВЕРХ фракціонування → далі в поле іонізації МС → отримати кожен іон маси для зарядки MS → розрахувати співвідношення амінокислотного складу і витяг бази даних програмне забезпечення → відношення пікової інформації та якісної інформацію, отримані білкові послідовності. Методи На основі кількісної протеоміки LC-MS / MS, як правило, ділиться на два види без маркування та методів маркування часто використовуваних типів маркування мають:. ITRAQ (in vitro), TMT (in vitro), SILAC (в живому організмі) на основі трьох видів ізотопу метод етикетці напівкількісний.У найбільш часто використовуваному iTRAQ кількісної протеоміки Прімера: iTRAQ складається з 8 (113/114/115/116/117/118/119/121) ізотопних міток композицій, ферментативні 8 випадків були різні зразками в ході експерименту → до поліпептид фрагментів були помічені ізотопні мітки → 8 видів в восьми випадках хорошого маркер поліпептидного суміші зразка в одному випадку → загальної проби в систему аналізу ОГО-МС / МС МС → дві фази балансу група iTRAQ нейтральна втрата відбувається при низькому генерації безлічі звітів іонної мас-області → площа піки була розрахована для кожних іонів репортера, щоб отримати відносний вміст тих же пептидних співвідношень → зважені відмінності між різними зразками розраховуються для отримання відносного змісту пептидів загального білка кількісного значення.. Технологія маркування in vitro, представлена технологією iTRAQ, є найпоширенішою технологією напівкількох виявлення протеомиків, яка проста в експлуатації та висока стабільність даних. Проте через обмежену кількість етикетки ізотопів незмічені кількісні технології протеоміки, такі як Label Free та DIA, мають багато переваг при виконанні великої кількості дослідних зразків. Детальніше див. На підсторінці.
http://www.wayenbio.com/danbaizhizuxue-316395-0-item-651757.html |
|